PCR-analyse: hva er det? Hvordan ta PCR-analyse

Det ikke så lenge siden utviklet en pålitelig og meget sensitiv og rask metode for diagnose av forskjellige infeksjonssykdommer hos mennesker. En slik fremgangsmåte kalles "PCR-analyse". Hva er det, hva er dens essens, hva han kan identifisere mikroorganismer og hvordan du tar det, vil vi beskrive i denne artikkelen.

History of oppdagelse

Oppfant polymerase-kjedereaksjon (PCR) er en amerikansk forsker Keri Myullis i 1983. Til å begynne med den patenterte metode for diagnostisering av "Cetus Corporation", der han arbeidet og dens skaper. Men i 1992 alle rettigheter og patenter ble solgt til selskapet "Hoffman-La Roche." Etter det, viste det seg at lignende studier ble utført parallelt og ble rapportert av andre amerikanske biologer, som Elis Chen, David Edgar, John RRE. I 1980 forlovet han seg i denne saken, og de sovjetiske forskere A. Slyusarenko A. Kaledin og S. Gorodetsky. Derfor, for å bestemme den eneste eieren av opphavsretten har ikke vært mulig. Mange fremragende biochemists har bidratt til utviklingen av fremgangsmåter for polymerasereaksjon og CERN patentert sine innovasjoner. På dette punkt analyse av PCR utføres i hele spesielt utstyrte laboratorier.

SAMMENDRAG PCR diagnostisk

PCR-analyse: hva er det og hvordan virker det? Det vesentlige ved fremgangsmåten ligger i det faktum at ved å bruke et spesielt enzym DNA polymerase in vitro for å øke i volum bestemt mikrobielle miljø. For å gjøre dette flere ganger formere tilgjengelig DNA-materiale. Tilstedeværelsen av et patogen i en prøve av mengden økes på bekostning av biokjemiske laboratorium manipulasjon, og bakterier vil ikke være vanskelig å påvise i mikroskopet.

Hvordan er studiet av materialet?

For å gjennomføre analysen kreves:

• DNA-templaten;
• Primerne materiale som forbinder endene av fragmentet;
• termostabile DNA polymerase-enzym;
• kjemikalier, sikre riktig drift av enzymer;
• bufferoppløsning er nødvendig for å skape de nødvendige betingelser for vekst og utvikling av DNA-materiale.

For å utføre PCR betjene 25-30 gjentagelser som består av tre trinn: denaturering, avspenning og forlengelse.

For å analysere polimezarnoy kjedereaksjon under anvendelse av en spesiell enhet - cycler. Moderne utstyr gjør at du kan installere den nødvendige varme og kjølerør program for å eliminere feil under diagnosen.

Hvor skal man søke diagnosen?

Polimezarnoy kjedereaksjon metode anvendes i forskjellige områder av medisinen:

• Forensic bruke den til å identifisere det genetiske materiale, slik som hår, spytt eller blod;
• PCR-analyse av blod bidrar til genotyping, eksempelvis for påvisning av individuelle genetiske plantet respons på spesifikke medikamenter;
• Ved en metode angitt familiebånd mellom mennesker;
• mest etterspurte PCR-metoden er blitt i medisinsk diagnose for bestemmelse av forskjellige infeksjonssykdommer.

Hva infeksjoner avslører PCR?

Således medisin har lenge blitt brukt PCR-analyse. Hva er det, har vi allerede lært. Og noen patogener kan oppdages med det? PCR diagnostisert følgende infeksjoner :

• hepatitt A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candidiasis;
• klamydia;
• mycoplasmosis;
• bakteriell vaginose;
• mononukleose;
• trichomoniasis;
• HPV-infeksjon;
• tuberkulose;
• herpes infeksjon i første og andre type;
• Helicobacter pylori-infeksjon;
• cytomegalovirus;
• difteri;
• salmonellose;
• HIV-infeksjon.

Dessuten er PCR-metoder som brukes i diagnostisering av kreft.

Fordelene ved fremgangs

Diagnostisk PCR har flere fordeler:

1. Høy følsomhet. Selv med bare noen få DNA-molekyler som mikroorganisme PCR-analyse bestemmer tilstedeværelsen av infeksjonen. Det hjelper metode for kroniske og latente sykdommer oppstår. Ofte i slike tilfeller, er mikroorganismen ukultiverte på andre måter.
2. For å undersøke et hvilket som helst passende materiale, slik som spytt, blod, seksuell seleksjon, hår, epitelceller. Det mest vanlige er en blodprøve og urogenital-vattpinne PCR.

3. Ikke krever en forlenget vekst kulturer. Den automatiserte prosessen med diagnostikk gjør det mulig å oppnå resultater av en undersøkelse etter 4-5 timer.
4. Metoden er nesten helt autentisk. Registreres bare isolerte tilfeller av falskt negativt resultat.
5. Evne til å identifisere flere typer av patogener i et prøvemateriale. Dette ikke bare gjør prosessen raskere ved diagnostisering av sykdommen, men også reduserer materialkostnadene betydelig. Ofte foreskriver legen en omfattende analyse av PCR. Prisen undersøkelse, som består av å bestemme de seks patogener, er ca 1.500 rubler.

Anbefalinger på forberedelse for analyse

Resultatene å være gyldig PCR-studier må bli testet, i henhold til anbefalingene til de forberedende tiltak for diagnose:

1. Før avlevering av spytt bør avstå fra å spise og medikament i 4 timer før prøvetaking materialet. Umiddelbart før prosedyren, skyll munnen med kokt vann.
2. De ovennevnte regler må styres, og når man tar prøven fra innsiden av kinnet. Etter skylling anbefales å gjennomføre en lett massasje på huden for å frigjøre prostata sekreter.
3. Urin er vanligvis samlet hjemme. For å gjøre dette, må du gjennomføre en grundig toalett på kjønnsorganene. I et sterilt plastbeholder er nødvendig å samle 50-60 ml urin. Det anbefales for kvinner for å sette inn tampongen inn i skjeden, og menn så mye som mulig for å trekke huden fold for å sikre renheten av materialet. Du kan ikke ta materialet under menstruasjon.
4. For levering av sæd til å avstå fra samleie i løpet av 3 dager forut for samling av materiale. Dessuten er leger rådes til å forlate bruken av badstuen og boblebadet, alkohol og krydret mat. I 3 timer før analysen er nødvendig å avstå fra å urinere.
5. For å bestå urogenitale smøre, for eksempel hvis analysen på en klamydia PCR, er både kvinner og menn anbefales at seksuell hvile i 3 dager. 2 uker før analysen kan ikke ta antibiotika. For en uke må du slutte å bruke intime gels, salver, vaginale stikkpiller, skylling. 3 timer før undersøkelsen bør avstå fra urinering. Under menstruasjon gjerde materialet ikke er utført, bare tre dager etter avslutningen av småblødninger kan ta urogenitale smøre.

PCR under svangerskapet

Ventetiden for en baby, mange smittsomme sykdommer, seksuelt overførbare sykdommer, er ekstremt farlig for normal fosterutvikling. Kjønnssykdommer kan utløse intrauterin utvikling, abort eller for tidlig fødsel, medfødte misdannelser hos barn. Derfor er det viktig å få tidlig i svangerskapet screening PCR. Pass analyse er nødvendig når du registrerer deg - opp til 12 uker.

Fence materialet kommer fra livmorhalsen med spesielle børster. Prosedyren er smertefri og utgjør ingen fare for babyen. Normalt under svangerskapet analysert for Chlamydia PCR-metoden, samt ureaplasmosis, mykoplasmose, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Slik undersøkelse kompleks kalt PCR 6.

PCR for påvisning av HIV-

På grunn av det faktum at fremgangsmåten for polymerase kjedereaksjon er svært følsom for endringer i kroppen, og vilkårene for diagnose, kan mange faktorer påvirker resultatet. Derfor PCR-analyse for HIV infeksjon er ikke en pålitelig metode, dets effektivitet - 96-98%. De resterende 2-4% av testen gir falske positive resultater.

Men i noen situasjoner uten PCR diagnosen HIV ikke kan gjøre. Vanligvis er det gjennomført til personer med falske negative ELISA. Disse tall indikerer at personen ennå ikke har utviklet antistoffer mot virus og kan ikke detekteres uten å øke antallet av multippel. At dette kan oppnås ved å gjennomføre en blodprøve PCR-metoden.

Det trengs også en diagnose av barn første leveår, født til HIV-positive mødre. Metoden er den eneste måten å sikkert fastslå status for barnet.

PCR for påvisning av hepatitt

Polymerase kjedereaksjon metode tillater påvisning av DNA fra virus av hepatitt A, B, C, lenge før dannelsen av antistoffer mot infeksjon eller symptom utbruddet. Særlig effektiv er den PCR-analyse på hepatitt C, siden 85% av en slik sykdom er asymptomatiske og uten rettidig behandling blir kronisk.

Rettidig påvisning av organismen vil bidra til å unngå komplikasjoner og langtidsbehandling.

Integrert PCR-screening

Omfattende PCR analyse: hva er det? Denne undersøkelsesmetode polimezarnoy kjedereaksjon som omfatter å bestemme samtidig flere arter infeksjon: Mycoplasma genitalia, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, herpes første og andre typen, gonoré papillomavirus. Prisen på denne diagnosen varierer fra 2000 til 3500 rubler. avhengig av klinikken, materialer og utstyr, så vel som av typen av analyse: kvalitativ eller kvantitativ. Det som trengs i ditt tilfelle - legen bestemmer. I noen tilfeller, du bare rett og slett oppdage tilstedeværelsen av patogenet i andre, for eksempel HIV, den viktige rollen kvantitativ titer. referert til som "PCR-analyse av 12" i diagnostikk av alle de ovennevnte patogener undersøkelse.

En forklaring på de analyseresultater

Transkripsjon PCR-analyse er ukomplisert. Det er bare to indeksskalaen - "negative" "positive" og Ved deteksjon av organismen kan leger med 99% konfidensintervall -te bekrefte tilstedeværelsen av sykdommen og for å begynne behandling av pasienten. Ved kvantitativ metode for bestemmelse av infeksjon i en tilsvarende kolonne indeks antall oppdaget bakterier vil bli spesifisert. Bare en lege kan bestemme graden av sykdommen og foreskrive den nødvendige behandling.

I noen tilfeller, for eksempel ved bestemmelse av HIV-infeksjon ved hjelp av PCR, med et negativt resultat, er det et behov for ytterligere undersøkelser for å bekrefte disse tallene.

Hvor kan man få testet?

Hvor pass-PCR-analyse i offentlig klinikk eller et privat laboratorium? Dessverre, i kommunelegen institusjoner utstyr og metoder er ofte utdatert. Derfor er det bedre å gi preferanse til private laboratorier med moderne utstyr og høyt kvalifisert personell. I tillegg, i en privat klinikk får du resultatene mye raskere.

I Moskva, mange private laboratorier tilbyr PCR-analyse for ulike infeksjoner. For eksempel, i slike klinikker som "Vita", "Integrert Clinic", "Happy Family", "Uro-Pro", utført PCR-analyse. Survey prisen er 200 rubler. for bestemmelse av et patogen.

Det kan konkluderes med at diagnosen av smittsomme sykdommer ved hjelp av PCR i de fleste tilfeller er en rask og pålitelig måte å detektere patogenet i kroppen på de tidlige stadier av infeksjonen. Likevel, i visse tilfeller, for å velge andre metoder for diagnose. Bestem behovet for en slik studie kan bare være en spesialist. PCR-analyse dekryptering krever også en profesjonell tilnærming. Følg legens råd og ikke gi sine egne tester, som ikke er nødvendige.